L'ATP-metria selettiva è una risposta rapida all'ATP-metria non specifica
L’impossibilità per i metodi classici di ATPmetria di prima o seconda generazione di differenziare i batteri dal lievito è un problema perché l’ATP del lievito maschera l’ATP batterico e viceversa. È quindi importante trovare una soluzione per l’analisi della bioluminescenza ATP specifica e rapida. Questo è il ruolo dell’ATPmetria selettiva rapida.
Cos'è l'ATP-metria selettiva rapida?
Questa analisi rapida e selettiva della bioluminescenza dell’ATP non richiede
- né una lunga incubazione in un mezzo selettivo,
- né una separazione fisica spesso impossibile per dimensione delle cellule mediante filtrazione o centrifugazione.
L’analisi selettiva rapida della bioluminescenza Atp utilizza l’ingegneria chimica dei reagenti selettivi per rilevare bioluminescentemente i microrganismi bersaglio in pochi minuti o ore.
Questo rilevamento dei microrganismi di interesse è discriminato dai microrganismi non bersaglio in un campione contenente sia microrganismi bersaglio che non bersaglio.
Non confondere l'ATPmetria rapida selettiva con l'ATPmetria selettiva.
È particolarmente fuorviante per gli utenti riferirsi a un kit Atpmetry come un kit Atpmetry selettivo, un kit di analisi di bioluminescenza dell’ATP che rimuove solo l’ATP libero e poi estrae l’ATP da tutte le cellule di un campione senza alcuna discriminazione, per analizzare l’ATP totale estratto da quelle cellule. Questa analisi Atp-metria non è specifica, è semplicemente un kit Atp-metria di seconda generazione.
L’Atpmetria selettiva e rapida non richiede una separazione fisica, come la filtrazione o la centrifugazione. La filtrazione e la centrifugazione non possono separare efficacemente molti microrganismi gli uni dagli altri.
Queste tecnologie di separazione danno risultati deludenti quando si cerca di distinguere i microrganismi separandoli in base alle loro dimensioni e poi analizzandoli con la bioluminescenza ATP.
Vediamo perché, per esempio, il lievito è così difficile da discriminare dai batteri lattici per filtrazione o centrifugazione.
Inoltre, la bioluminescenza rapida e selettiva dell’Atp non richiede una crescita preliminare del mezzo per essere selettiva. Vedi sotto perché l’incubazione selettiva in mezzo di crescita + bioluminescenza Atp non è una soluzione rapida per la discriminazione del lievito dai batteri?
L’ Atpmétrie sélective et rapide ne nécessite pas de séparation physique, tel que la filtration ou la centrifugation. La filtration et la centrifugation ne peuvent séparer efficacement de nombreux micro-organismes les uns des autres.
Ces technologies de séparation donnent des résultats décevants lorsqu’on essaie de distinguer les micro-organismes en les séparant en fonction de leur taille pour les analyser ensuite par bioluminescence de l’ATP.
Voyons pourquoi, par exemple, les levures sont si difficiles à discriminer des bactéries lactiques par filtration ou centrifugation.
En outre, la bioluminescence Atp sélective rapide ne nécessite pas une croissance préalable du milieu pour être sélective. Voir ci-dessous pourquoi l’incubation sélective en milieu de croissance + bioluminescence Atp n’est pas une solution rapide pour la discrimination des levures par rapport aux bactéries ?
Perché il lievito non può essere separato da alcuni batteri?
Perché il lievito non può essere facilmente separato dai batteri dell’acido lattico in una matrice di campione alimentare?
Come mostra l’immagine a sinistra, i batteri dell’acido lattico si attaccano molto spesso al lievito.
Il lievito non può essere facilmente separato da tutti i batteri acetici e lattici. Questo perché alcune cellule batteriche aderiscono al lievito e formano cluster microbici.
A causa di questo problema, la separazione fisica del lievito e dei batteri lattici per filtrazione o centrifugazione in una vera matrice di bevande non è né fattibile né realistica.
Può funzionare se fai la tua miscela di lievito e batteri lattici in condizioni di laboratorio controllate e la mescoli in una matrice di bevanda, ma non funzionerà in una situazione reale di analisi di campioni di bevande contaminate da flora viziata.
Inoltre, la semina artificiale di batteri lattici o lieviti non appartenenti alla stessa matrice cibo-bevanda è stressante per questi ceppi e può innescare uno stato vitale ma non coltivabile (VNC) in alcuni microrganismi, che può essere recuperato solo mediante incubazione in un mezzo selettivo.
Perché l'incubazione in un substrato selettivo + Atpmetria non è una soluzione rapida per discriminare il lievito dai batteri?
L‘Atpmetria selettiva rapida nell’industria alimentare dovrebbe servire come strumento di preallarme in loco che indica il rischio di deterioramento dei prodotti, in modo che il produttore possa intraprendere un’azione correttiva immediata per ridurre la flora di deterioramento.
Per questo motivo, incubare un campione in un terreno di crescita selettivo per 48 ore e poi identificare la crescita del lievito tramite Atpmetria non è una soluzione, poiché nel frattempo il deterioramento del prodotto continua e la flora di deterioramento aumenta.
Inoltre, molti lieviti selvatici come il Brettanomyces bruxellensis hanno bisogno di 7-10 giorni per crescere su terreni di coltura agar per sviluppare colonie visibili.
Questo è ancora più vero per alcuni batteri lattici, che hanno bisogno di 10 giorni per crescere su substrati selettivi.
Kit di ATPmetria di quarta generazione: rilevamento selettivo del lievito discriminato dai batteri dell'acido lattico/acetico.
Principio di Atpmetria selettiva.
Atpmetria selettiva, permette la rilevazione selettiva di ATP da microrganismi mirati, senza rilevare ATP da altri microrganismi in una popolazione mista di microrganismi diversi. Sopra è presente una popolazione di lieviti e batteri. Un trattamento preliminare distrugge il lievito e rimuove il suo ATP. Questo lascia la popolazione batterica mirata, le cui cellule possono essere lisate e il loro ATP rilasciato e rilevato dalla bioluminescenza.
Un esempio di Atpmetria selettiva rapida: il rilevamento di Bretts nel vino.
Se volete sapere come il nostro kit Brett Alert può discriminare selettivamente i lieviti Brettanomyces bruxellensis dai batteri in campioni di vino presi dal fondo delle botti o dei tini, cliccate su questo link.
Applicazioni dell'Atpmetria selettiva
